費氏弧菌發(fā)光桿菌菌種程序，通常分為母種、原種和栽培種3個層次，也就是通常所說的一級、二級、三級菌種。其中母種的分離選育技術性強，要求精化；而原種和栽培種的制作則相對比較簡單。下面介紹各級菌種的制作技術。
母種的分離選育方法是：母種主要采用人工選擇、誘變育種、雜交育種和原生質(zhì)融合等手段獲得。作為一般制種專業(yè)戶，可以采用人工選擇方式分離培育母種，具體步驟與操作方法如下。
1.采集種源。費氏弧菌發(fā)光桿菌從野生或人工栽培群體中選擇有代表性的優(yōu)良菇體作為種源。①種菇選擇時間。一般在11月上中旬，在*批和第二批菇中挑選。因為這段時間蘑菇生長正是旺盛時期，菌絲生活力強，子實體健壯，質(zhì)量好，加之氣溫適宜，蘑菇能正常成熟。②種菇的標準是：八成熟，朵形圓正，肉質(zhì)肥厚，顏色潔白，無病蟲害。采集一二朵符合上述標準的種菇編上號碼，作為分離母種的材料。從栽培室采集的應標有原菌株代號。
2.培養(yǎng)基配制。瓊脂培養(yǎng)基又叫PDA培養(yǎng)基，常用配方為：馬鈴薯200克、瓊脂16～18克、葡萄糖20克、水1000毫升。先將馬鈴薯洗凈去皮，切成薄片，置于鋁鍋內(nèi)加水煮沸15～30分鐘至薯塊酥而不爛為止。煮后用6～8層事先浸濕擰干的紗布過濾，過濾后加入瓊脂16～18克（氣溫低時加16克，氣溫高時加18克）再煮，并不斷攪拌，使固體瓊脂*溶化，再用4～6層紗布過濾。將濾液加水至1000毫升加入20克葡萄糖，攪拌溶化趁熱分裝試管。裝入量為試管高度的1/4～1/5，注意培養(yǎng)基不要粘著試管口，管口用棉塞塞緊，或?qū)⒅貉b入玻璃三角瓶內(nèi)，每瓶裝量為20毫升。然后置于高壓鍋內(nèi)，在壓力達108千帕，鍋內(nèi)溫度為121℃滅菌30分鐘左右。滅菌后及時取出，趁熱將試管斜排于桌上，費氏弧菌發(fā)光桿菌冷卻后即成為固體斜面培養(yǎng)基。
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