滅菌方法

1、高壓蒸汽滅菌：高壓蒸汽滅菌適合于耐高溫培養(yǎng)基、接種器械和蒸餾水的滅菌。培養(yǎng)基在愛制備過程中混入各種雜菌，分裝后應(yīng)立即滅菌，至少應(yīng)在24h內(nèi)完成滅菌工作。滅菌時一般是在0.105MPa壓力下，溫度121℃時，滅菌15~30min即可。消毒時間不宜過長，也不能超過規(guī)定的壓力范圍，否則有機物質(zhì)特別是維生素類物質(zhì)就會在高溫下分解，失去營養(yǎng)作用，也會使培養(yǎng)基變質(zhì)、變色，甚至難以凝固。 將蒸餾水或自來水裝在三角瓶中，裝水量一般不超過瓶的2/3，用牛皮紙或硫酸紙包扎封口，然后放入高壓鍋中滅菌后即為無菌水。 滅菌后的培養(yǎng)基可放到培養(yǎng)室中預(yù)培養(yǎng)3d，若無污染現(xiàn)象，則證明滅菌是*的，可以使用。暫時不用的培養(yǎng)基置于10℃下保存。含IAA或GA3的培養(yǎng)基應(yīng)在1周內(nèi)用完，其他培養(yǎng)基zui多也不要超過1個月。

2、過濾滅菌：一些植物生長調(diào)節(jié)劑及有機物，如IAA、GA3、ZT、CM等，遇熱容易分解，不能與培養(yǎng)基一起進行高溫滅菌，而要使用細菌過濾器濾去其中的雜菌。細菌過濾器與濾膜（孔徑0.45微米）使用之前要先進行高壓滅菌。過濾后的溶液要立即加入培養(yǎng)基中，若為液體培養(yǎng)基，可在培養(yǎng)基冷卻至30℃時加入；若為固體培養(yǎng)基，必須在培養(yǎng)基凝固之前（50-60℃）加入，振蕩使溶液與其他成分混合均勻。保存方法 已經(jīng)滅菌完畢的培養(yǎng)基從高壓滅菌鍋中取出后，立即放在平整的臺面上，若大批量可用果箱裝好并標(biāo)記好其用選后，送到接種室，讓其自然冷卻凝固。滅好的培養(yǎng)基經(jīng)過3d的預(yù)培養(yǎng)，以便觀察培養(yǎng)基是否*滅菌，這樣能夠使某些因為沒有*滅菌的培養(yǎng)基，在接種前被檢出，可避免雜菌污染而造成不必要的損失，這點對少而重要的材料尤其值得注意。但是在同等條件下經(jīng)多次使用無污染后，就沒必要再擺3d后才使用，而是冷卻凝固后就可使用了。

(1)防塵 已經(jīng)滅好菌的培養(yǎng)基要注意防塵。如果培養(yǎng)基在衛(wèi)生條件差的地方貯存，依附在塵埃中的細菌、真菌等會落在培養(yǎng)瓶表面，使用前若不進行表面滅菌處理，在接種時就容易隨著氣流進入容器，使其受到污染，影響組織培養(yǎng)工作的順利進行，因此培養(yǎng)基必須放在干凈、衛(wèi)生的接種室內(nèi)。

(2)避光 備用培養(yǎng)基應(yīng)貯于光線較暗的房子里面，因為吲哚乙酸等某些物質(zhì)易見光分解。在光照下，一些培養(yǎng)基添加物的成分也會發(fā)生變化。在接種室里掛上較厚的窗簾或在培養(yǎng)基的箱子上加蓋厚的黑布，這樣可以使培養(yǎng)基免受光線的影響。

(3)恒溫 培養(yǎng)基冷卻后，可以將其放在10℃左右的冰箱中貯藏3～5周；在大批量中可以放在裝有空調(diào)的接種室內(nèi)，擺放2周左右，溫度控制在20℃以內(nèi)；若擺放時間為2～5d，溫度不超過28℃即可。但是在培養(yǎng)基擺放過程中溫度不應(yīng)過高，同時還應(yīng)避免溫度有較大幅度的變化，隨著貯藏室氣溫的升高或降低，裝有培養(yǎng)基容器內(nèi)的空氣會跟著膨脹或縮小，帶來菌類進入培養(yǎng)基，造成貯藏期間培養(yǎng)基的大量污染。

(4)定期更新 培養(yǎng)基不宜長期貯存，特別是固體培養(yǎng)基。隨著時間的推移，培養(yǎng)基里的水分以氣態(tài)選出，培養(yǎng)基的含水量便逐漸降低，使培養(yǎng)基的濃度和理化性狀發(fā)生改變，對以后的外植體培養(yǎng)或植株的繼代轉(zhuǎn)接及生根培養(yǎng)均不利；培養(yǎng)基貯存過長，空氣中夾雜的細菌、真菌也可能降落到培養(yǎng)基表面引起污染；當(dāng)貯藏含有吲哚乙酸、椰乳等物質(zhì)的培養(yǎng)基時，環(huán)境中的光線會使吲哚乙酸發(fā)生光解，也會使椰乳所含的一些成分發(fā)生變化。因此結(jié)合任務(wù)做好培養(yǎng)基的配制和使用計劃十分必要，一般情況下培養(yǎng)基貯存時間不應(yīng)超過1周。