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    免疫學抗體實驗室方法

    點擊次數:1433  更新時間:2015-07-10

    抗體作為實驗試劑已有很多年了??梢园l展專門針對想要抗原的特殊抗體。另外,抗體試劑與抗原相互作用的結合通常具高親和力,這就使得檢測很少量靶抗原成為可能。典型的靶蛋白是:高度純化的蛋白質、糖蛋白、或這些分子復雜異質的混合物(如豚草屬花粉)。

    由于抗原結合區與效應分子的功能決定區在不同的區域,所以,免疫球蛋白(Igs)在基因和分子水平實際上是組合結構。例如,把編碼某一特定恒定區的基因和許多編碼可變區的基因中的任何一個相連,這一特定恒定區介導補體結合的能力能夠得以維持同時仍能被地定為靶目標。因此,無論是由恒定區基因決定的防御機制,還是由許多可變區基因決定的結合抗原的特異性,Ig的基因家族都成功地保持了恒定。其中,可變區基因在進化期間已增加了很多,同時通過基因復制和體細胞突變,也擴充了許多。

    同類抗體(異構型),Ig分子的恒定區中含有共同的肽結構。雖然這些抗體可以與不同的抗原起反應,但在免疫測定中,可以用同一抗體試劑檢測他們。例如,與兩種不同變應原(如豚草屬花粉和貓的毛皮垢屑)起反應的IgE抗體,它們兩者都可以用抗-IgE抗體來檢測。其中,該抗-IgE抗體能與所有IgE分恒定區的某一肽段特異性地結合(見后)。在這個例子中,雖然每種抗體都有不同的抗原結合位點,但它們的ε重鏈恒定區的某一肽段都能與抗-IgE抗體反應。

    當設計一個用抗原或抗體作試劑的免疫測定方法時,在選擇合適的分析方法方面,zui重要的因素是待測物(抗原或抗體)的濃度。臨床免疫實驗室zui常用的免疫化學方法有:(1)凝膠沉淀法和比濁法,用于濃度相對比較高的分析物(毫克到微克每毫升)(2)競爭性替代或免疫測定技術,如放射性免疫測定(RIA)和酶免疫測定(EIA),用于較低濃度的分析物(微克到納克每毫升)。免疫熒光顯微技術,包括流式細胞儀,對檢測細胞表面抗原或完整細胞內某些細胞漿或細胞核抗原很有用。各種方法大致的靈敏度限度列在表31-1。如接下來這部分所描述的那樣,各種方法zui終都是以檢測抗原抗體之間的反應為根據。

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